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信息来源:  发布日期:2010/2/23 14:50:21

NF-κB(p65)蛋白核转位与唾液腺腺样囊性癌

侵袭和转移关系的研究

严 明   张萍   王丽珍   张春叶   吕燕   陈万涛  

 

基金项目:上海市科学技术委员会资助(08DZ2271100)

上海市重点学科建设项目资助(S30206) 

作者单位:200011 上海 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颌面外科(严 明、张萍、吕燕、陈万涛), 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科(王丽珍、张春叶)

通讯作者:陈万涛, E-mail:  ,    电话: 

 

【摘要】 目的 检测NF-κB p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)临床组织标本中的表达水平和转位情况,分析其与ACC侵袭和转移之间的关系。方法  应用免疫组织化学法,检测58例唾液腺腺样囊性癌石蜡标本中p65蛋白的表达和细胞定位,分析p65蛋白的表达、转位与ACC转移和其他临床病理参数的关系。结果  在转移和非转移的ACC组,p65细胞表达阳性率无显著差异(P=0.2641);而p65蛋白的核阳性表达率ACC转移组明显高于非转移组(P=0.0261),并且与ACC神经浸润相关(P=0.0244)。 结论  NF-κB通路的激活可能在唾液腺腺样囊性癌侵袭和转移中发挥重要作用。

[关键词]NF-κB p65蛋白;唾液腺腺样囊性癌;转移

[中图号]       [文献标识码]      [文章编号]

 

Translocation of NF-κB p65 may be correlated with the invasion  and metastasis

   of salivary adenoid cystic carcinoma 

YN Ming, ZHANG Ping, WANG Li-zhen, ZHANG Chun-ye, Lǘ Yan, CHEN Wan-

tao.DeparAtment of Oral and Maxillofacial Surgery, Shanghai Ninth

 Peoples Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University,

 Shanghai 200011, China

 

【Abstract】 Objective To examine the expression level of NF-κB p65

 protein and its translocation in the tissues of salivary adenoid

 cystic carcinoma and to analyze their relationship to the invasion and

 metastasis of ACC. Methods  The p65 protein expression was examined in

 58 patients with adenoid cystic carcinomas of salivary gland by

 immunohistochemical staining. The relationship between p65 protein and

 ACC metastasis and invasion was analyzed. The association between p65

 expression levels and the clinicopathological parameters were also

 examined. Results There was no significant difference of p65 positive

 rate between the non-metastatic group and the metastatic group. But

 the p65 nuclear positive rate was higher in the metastatic group than

 in the non-metastatic group, and the p65 nuclear expression level was

 related to the ACC invasion. Conclusion  NF-κB signal pathway may

 play an important role in invasion and metastasis of adenoid cystic

 carcinoma of salivary gland.

[Key words]NF-κB p65 protein; Adenoid cystic carcinoma; Metastasis

 

 

    唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)是最常见的唾液腺恶性肿瘤之一。ACC浸润性极强,常沿神经和骨膜扩散,并易侵入血管,早期即可发生血行转移,转移率高达40%。p65又称RelA,是NF-κB家族的主要成员,是该信号转导通路的核转录因子。NF-κB通路属于蛋白水解酶依赖的受体信号转导通路,因其能够与B细胞免疫球蛋白的κ轻链基因的增强子κB序列(5'-GGGACTTTCC-3')特异结合而得名。静息状态下,p65在IκBα监管下,与p50结合形成p65/p50二聚体被定位于细胞质内。在外来信号的作用下,NF-κB抑制因子IκBα被酶解,p65被释放,随之转位进入细胞核内,与特定基因的启动子区域 (5'-GGGACTTTCC-3') 结合,启动调控基因的转录。它调控的靶基因包括免疫相关受体、细胞因子、炎症因子、黏附分子、急性期蛋白、凋亡相关蛋白等[1]

近几年研究表明,NF-κB信号通路与肿瘤的发生[2-4]、增殖[5]、分化、凋亡[6]、侵袭和转移有密切关系[7]。但是,NF-κB信号通路的激活是否与ACC转移有关并不十分清楚。本研究通过免疫组织化学分析口腔腺样囊性癌肿瘤组织细胞中p65蛋白的表达及核转位,探讨NF-κB通路激活状态与ACC侵袭和转移等临床指标的关系。

材料与方法

1. 材料

收集上海交通大学医学院附属第九人民医院1994年~2004年经过手术后病理确诊的58例腺样囊性癌石蜡标本,其中男26例,女32例。收集患者吸烟、饮酒、肿瘤部位等资料。经病例资料分析,其中未发生转移的病变30例,已发生转移的28例;病理显示无神经浸润的标本24例,有神经浸润的标本34例。组织标本均在术后经4%甲醛固定,常规石蜡包埋。

2. 主要试剂

鼠抗人NF-κB p65单克隆抗体(Sigma, 美国),HRP-兔抗鼠IgG(H+L)(Santa Cruz, 美国)。

3. 免疫组化染色

石蜡切片脱蜡至水,0.01M PBS洗3次,5min/次;用煮沸0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)抗原修复20min,冷却至室温后,蒸馏水冲洗2次,PBS洗3次,5min/次;每张切片加入3%双氧水溶液,室温孵育10min,PBS洗3次,5min/次;每张切片加50μL 抗p65单克隆抗体(1:200),4℃孵育过夜。第二天室温复温30min,PBS洗3次,5min/次;每张切片加入50μL二抗,室温孵育1h,PBS洗3次,5min/次;每张切片加入50μLDAB显色剂充分显色后,蒸馏水冲洗,苏木素复染,0.1%盐酸分化,自来水冲洗,PBS冲洗返蓝;梯度乙醇脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封片。染色过程中以PBS代替一抗作为阴性对照。

4. 结果判定

请3位病理科医师双盲阅片。p65以细胞中出现黄色或棕黄色为阳性,随机观察10个视野,计算阳性细胞占癌细胞的比例。采用半定量方法:p65阳性的癌细胞占全部癌细胞总数的比例为a,p65的核阳性细胞数占全部癌细胞总数的比例为b,a、b按<5%, 6~30%, 31~50%, 51~80%, >80%分为五组。

5. 统计学分析

应用SAS 6.0统计分析软件,对p65表达及p65核阳性与腺样囊性癌临床指标进行非参数统计(Wilcoxon Rank Sums)。P<0.05为差异具有统计学意义。

结   果

1. 临床参数比较

未转移组和转移组的患者性别、年龄、吸烟、喝酒及肿瘤部位采用卡方统计,结果见表1。转移和未转移组其性别统计P=0.178, 年龄P=0.886,吸烟因素P=0.337, 饮酒因素P=0.607, 肿瘤部位P=0.349。ACC的转移和年龄、性别、吸烟、饮酒和肿瘤部位等因素无明显相关性(P>0.05),而且两组标本的选取在年龄、性别等指标也没有差异, 两组具有可比性。

表1  未转移组和转移组ACC临床参数比较

参数 

 

未转移组

转移组

χ2

性别

16

10

14

18

1.818

年龄

60

22

21

60

8

7

0.021

吸烟

11

7

19

21

0.921

饮酒

7

5

23

23

0.265

部位

腮腺

8

10

下颌下腺

4

4

舌下腺

3

6

小唾液腺

15

8

3.288

2. p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌组织细胞中的表达

免疫组化染色显示,腺腺样囊性癌组织中p65表达以细胞质和细胞核阳性染色为主,部分肿瘤细胞单独为细胞质阳性染色(图1)。p65的阳性率在未转移组和转移组两组间无明显差异((P=0.6416)(表2,图2)

表2  p65在ACC组织中的表达阳性率(例)

组别

<5%

10~30%

30~50%

50~80%

>80%

非转移

2

9

5

8

6

转移

1

5

8

10

4

3. p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌组织中的核转位

p65在ACC肿瘤组织中的核阳性率结果见表3。统计结果显示,转移组与非转移组p65的核阳性率有显著差异(P=0.0261)(表3,图3)。

表3 ACC组织中p65的核阳性率(例)

  组别

<5%

10~30%

30~50%

50~80%

>80%

非转移组

12

9

5

3

1

转移组

6

8

9

2

3

 

       

图1 p65蛋白在唾液腺腺样囊性癌组织细胞中的表达 ①未转移组 ②转移组 ③转移组(免疫组化 ×200)

                 

图2 p65蛋白在未转移组和转移组ACC中的阳性率          图3 p65蛋白在未转移组和转移组ACC中的核阳性率

    4. p65表达与肿瘤分化及神经浸润的关系

58例口腔ACC中,Ⅰ~Ⅱ级的组织标本38例,Ⅲ~Ⅳ的标本20例。p65的阳性率分别为27.78%和30.88%,不同肿瘤分化之间差异无统计学意义(P>0.05)。58例标本中神经浸润标本34例,无浸润的标本24例,p65阳性率与神经浸润无显著性相关(P>0.05)。p65核阳性率与肿瘤分化之间也无显著相关性(P>0.05)。但是,p65的核阳性率和神经浸润之间有相关性(P<0.05)。

讨   论

越来越多的研究发现,NF-κB信号转导通路在癌变过程中起着重要作用[8],特别是RelA(p65)亚基可反式激活多种基因,调节细胞的生长、凋亡、血管生成和侵袭转移。p65蛋白在多种外界刺激下,脱离IκBα的阻滞而转位至细胞核,这是NF-κB信号转导通路活化的标志。研究证明,NF-κB通路的持续性激活可导致抗凋亡因子的分泌及血管的生成,是肿瘤侵袭、转移、复发和化疗耐药的始作俑者。本研究也发现,在已发生转移的腺样囊性癌临床标本中,p65核转位更为明显,说明NF-κB信号转导通路在转移的ACC中处于持续性激活状态,可能在ACC转移中发挥重要作用。

有研究发现,NF-κB通路中的多种蛋白,包括RelAp105/p50 和IκBα在高转移黑色素瘤中表达明显增高,阻断高转移的黑色素瘤细胞的NF-κB信号通路可以明显降低细胞的肺转移率[9]。Li等[10]通过体内外实验研究证实抑制NF-κB信号通路的活性,可抑制食管癌细胞的增殖和转移。对于NF-κB通路在肿瘤侵袭和转移中的机制,有研究发现它能调节与肿瘤转移有关的ICAM-1、VCAM-1、MMPs(MMP-9)、化学因子受体(如CXCR4, uPA)等基因的表达。与肿瘤转移密切相关的诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthaseiNOS) 也受NF-κB的调节。近来研究发现,乳腺癌转移抑制因子-1( Breast cancer metastasis suppressor 1BRMS1)作为乳腺癌和黑色素瘤转移的抑制基因之一,也是通过抑制NF-κB信号通路中IκBα磷酸化、降解和抑制uPA而发挥作用[11]Helbig等研究发现,NF-κB可直接诱导趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的表达来调节乳腺癌细胞系的运动性,而且基质细胞衍生因子(SDF-1)所介导的迁移也更为明显,由此可见NF-κB的活性在乳腺癌的转移和器官特异性归巢中起到一定的作用[12]。头颈部鳞状细胞癌NF-κB信号通路和细胞有丝分裂活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinaseMAPK)通路的共激活可以使IL-8和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factorVEGF)表达增高[13] ,参与肿瘤细胞的血管生成。

此外,本研究还发现,NF-κB p65的核转位也与ACC的神经浸润相关。ACC的神经浸润机制并不是十分明确。研究表明,ACC可分泌一种神经生长因子(nerve growth factor, NGF)。NGF可通过神经营养因子p75选择性的激活NF-κB[14]。Tacconelli等也发现NGF的酪氨酸受体激酶受体(由原癌基因trk编码的一种酪氨酸蛋白激酶受体,TrkA)的剪接变体TrKAIII通过IP3K/Akt/NF-κB通路促进肿瘤发展[15]。此外,NF-κB信号通路可调节多种与肿瘤侵袭相关的基因和细胞因子的表达,包括金属基质蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)、纤溶酶原活化因子(urokinase-type plasminogen activator uPA),白介素8 (Interleukin 8IL-8)等。骨桥蛋白通过NF-κB信号通路上调MT1-MMP的表达,通过MMP2促进肿瘤细胞的迁徙和对细胞外基质的浸润[16]

本文研究了口腔唾液腺腺样囊性癌组织标本中p65蛋白的表达及核转位,发现p65的核转位与ACC的转移和神经浸润相关。因此,深入研究NF-κB信号转导通路在ACC转移中的机制,可能会为ACC的诊断和治疗提供新的思路。

                                参考文献

    1  Ghosh S, Karin M. Missing pieces in the NF-kappaB puzzle. Cell, 2002,(109

 Suppl:S81-96.

    2 Greten FR, Eckmann L, Greten TF, et al. IKKbeta links inflammation and 

tumorigenesis in a mouse model of colitis-associated cancer. Cell, 2004,

 118(3):285-296. 

    3 Luo JL, Maeda S, Hsu LC, et al. Inhibition of NF-kappaB in cancer cells converts

 inflammation- induced tumor growth mediated by TNFalpha to TRAIL-mediated tumor

 regression. Cancer Cell, 2004,6(3):297-305. 

    4 Pikarsky E, Porat RM, Stein I, et al. NF-kappaB functions as a tumour promoter in 

inflammation-associated cancer. Nature2004431(7007):461-466. 

    5 Shishodia S, Aggarwal BB. Nuclear factor-kappaB activation mediates cellular

 transformation, proliferation, invasion angiogenesis and metastasis of cancer. Cancer

 Treat Res, 2004,119: 139-173.

    6  Wang CY, Mayo MW, Korneluk RG, et al. NF-kappaB antiapoptosis: induction of

 TRAF1 and TRAF2 and c-IAP1 and c-IAP2 to suppress caspase-8 activation. Science, 1998,

 281(5383):1680-1683.

    7 Agarwal A, Das K, Lerner N, et al. The AKT/I kappa B kinase pathway promotes 

angiogenic/metastatic gene expression in colorectal cancer by activating nuclear

 factor-kappa B and beta-catenin. Oncogene, 200524(6):1021-1031.

    8  汤晓飞, 赵艳华, 张敏, 等. Nrf2和NF-κB在口腔癌和癌前病变细胞中的表达及意义. 北京

口腔医学, 2009, 17(3):135-137.  

    9  Huang S, DeGuzman A, Bucana CD, et al. Nuclear factor-kappaB activity correlates 

with growth, angiogenesis, and metastasis of human melanoma cells in nude mice.

 Clin Cancer Res, 20006(6):2573-2581.

    10  Li B, Li YY, Tsao SW, et al. Targeting NF-kappaB signaling pathway suppresses

 tumor growth, angiogenesis, and metastasis of human esophageal cancer. Mol Cancer

 Ther, 2009 8(9):2635-2644.

    11  Cicek M, Fukuyama R, Welch DR, et al. Breast cancer metastasis suppressor 1

 inhibits gene expression by targeting nuclear factor-kappaB activity. Cancer Res,

 200565(9):3586-3595.

    12  Helbig G, Christopherson KW, Bhat-Nakshatri P, et al. NF-kappaB promotes breast 

cancer cell migration and metastasis by inducing the expression of the chemokine

 receptor CXCR4. J Biol Chem, 2003,278(24):21631-21638.

    13  Bancroft CC, Chen Z, Dong G, et al. Coexpression of proangiogenic factors IL-8

 and VEGF by human head and neck squamous cell carcinoma involves coactivation by

 MEK-MAPK and IKK-NF-kappaB signal pathways. Clin Cancer Res, 20017(2):435-442.

    14  Carter BD, Kaltschmidt C, Kaltschmidt B, et al. Selective activation of NF-

kappa B by nerve growth factor through the neurotrophin receptor p75. Science, 1996

272 (5261):542-545.

    15 Tacconelli A, Farina AR, Cappabianca L, et al. TrkA alternative splicing: 

a regulated tumor-promoting switch in human neuroblastoma. Cancer Cell, 2004,

 6(4):347-360.

    16 Greten FR, Eckmann L, Greten TF, et al. IKKbeta links inflammation and 

tumorigenesis in a mouse model of colitis-associated cancer. Cell, 2004,118(3):285-

296.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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